里氏木霉菌消杀方式
1、将粉碎的秸秆用去离子水泡发后,烘干。在培养瓶中加入液态发酵液和烘干的秸秆,然后接入菌悬液,振荡培养箱中培养。里氏木霉取自铁尾矿改良的盐碱土,单一菌种对秸秆降解率20天达到百分之50。
里氏木霉的菌落特点
1、里氏木霉菌落的外观特征颇为独特,呈现出广铺的棉絮状,其初生菌丝紧密且平坦,为白色。随后,边缘处逐渐形成浅绿色的产孢子丛束区域,而菌落的反面则保持无色状态。分生孢子梗菌丝在这一过程中展现出极高的分枝特性,这些短侧枝透明,多为多分枝状。小梗呈瓶形,其中部弯曲,其形态特征明显。
2、菌落呈广铺的棉絮状,起初为白色致密的平坦菌丝,而后边缘出现浅绿的产孢子丛束区,反面无色。分生孢子梗菌丝的短侧枝,透明,多分枝;小梗瓶形,中部弯曲;分生孢子椭圆形或长形,单细胞,透明,无色,壁光滑,成堆时绿色。
3、两突变体比出发菌株在MM平板上生长减速近一半,菌落也相对疏松;在含0.2%TritonX-100的MM平板上生长始,突变子菌落形成长的气生菌丝,导致菌落蓬松;突变子的菌丝顶端与菌丝中间区域相比明显有变化,即菌丝顶端颜色变暗;突变子在PDA平板培养4d后,仅有中间部位产生绿色孢子,周边围绕白色菌丝,而出发菌株产孢面积明显较大。
4、在他们的研究报告中,为了构建一株既含有上述双酶特性的独一无二的高效菌株,尝试整合高纤维素酶产出活性的一株里氏木霉和高几丁质酶产出活性的一株T.harzianum的原生质体。他们利用细胞溶解酶分别从16株T.harzianum和里氏木霉中分离得到了原生质体。原生质体融合系统采用的常规的PEG作为助融剂。
5、纤维素酶菌的筛选步骤:采用里氏木霉A3先进行紫外线和亚硝基胍复合诱变后,将处理过的孢子接种于纤维双层平板上,30℃培养5-8天,15℃放置7-10天,挑选透明圈直径和菌落直径比较大的单菌落进行三角瓶固态发酵再筛选,得到了产纤维素酶活力很高的里氏木霉。
6、在深绿木霉中可能存在光敏色素(phytochrome),因为红光抑制菌丝生长,并影响一些基因转录(Casas-Flores et al.,2004;Rosales-Saavedra et al.,2006)。
里氏木霉菌落特点
里氏木霉菌落的外观特征颇为独特,呈现出广铺的棉絮状,其初生菌丝紧密且平坦,为白色。随后,边缘处逐渐形成浅绿色的产孢子丛束区域,而菌落的反面则保持无色状态。分生孢子梗菌丝在这一过程中展现出极高的分枝特性,这些短侧枝透明,多为多分枝状。小梗呈瓶形,其中部弯曲,其形态特征明显。
菌落呈广铺的棉絮状,起初为白色致密的平坦菌丝,而后边缘出现浅绿的产孢子丛束区,反面无色。分生孢子梗菌丝的短侧枝,透明,多分枝;小梗瓶形,中部弯曲;分生孢子椭圆形或长形,单细胞,透明,无色,壁光滑,成堆时绿色。
最终,经过优化的里氏木霉菌株表现出前所未有的性能:β-葡萄糖苷酶的特异性活性提升了约72倍,木聚糖酶活力提高了约42倍,胞外蛋白滴度高达80.6克/升(0.24克/(L·h)),这是目前里氏木霉实验中酶滴度的最高记录。这一突破性的成果,为生物燃料产业的可持续发展提供了新的可能。
里氏木霉基因表达与功能分析
里氏木霉产生的一种主要纤维酶——纤维二糖水解酶I(cellobiohydrolase1),由单拷贝基因编码,其产量可达里氏木霉胞外分泌性蛋白总量的50%,凸显cbh1启动子的强大功能。在里氏木霉的遗传改造中,cbh1启动子和终止子序列常被用于构建载体,前导肽序列则引导重组蛋白分泌性表达。
里氏木霉具有极好的合成蛋白和分泌蛋白的能力;并具有真核的分泌机制,很可能还具有与哺乳动物系统相似的蛋白修饰性能,如:高甘露糖型和N-糖基化[2]等。
尿嘧啶营养缺陷型标记具有转化效率高、容易得到转化子等优点,研究中通常将尿嘧啶营养缺陷型的互补基因pyrG转入相应的营养缺陷型菌株,使pyrG基因与受体菌的缺陷基因互补,使受体菌表现野生型生长而作为选择标记。
它用于分解木材中的纤维素,提高纸浆的质量和生产效率。在纺织行业中,里氏木霉产生的酶类能有效去除织物上的污渍,提升洗涤效果。在食品和医药领域,它能够分解淀粉和蛋白质,生产出各种生物活性物质,满足不同行业的需求。
例如,在T.reesei基因组第29条scaffold的CAZyme基因簇区,外切纤维二糖水解酶cel7a、纤维素膨胀因子和木聚糖酶4在槐二糖和纤维素诱导下同时表达。上述结果表明,CAZyme基因成簇分布具有重要的意义。由于这些区域与其他真菌没有共线性的信号,表明在T.reesei中这些基因发生了重排,这种重排对其在进化上是有利的。
木霉对镉的吸附
1、里氏木霉(T.reesei)RUT C30工业化生产纤维素酶的副产品——菌丝体,对镉离子和铜离子有很好的吸附能力,用NaOH处理木霉后,菌体的吸附能力有所提高。
2、盆栽试验表明,木霉突变体P6接种油菜后,能明显地减轻镉对油菜生长的负面影响,增强油菜茎部对镉的吸附能力(p<0.05)。
3、木霉具有超强的生存能力,可抵抗各种有机污染和重金属,且生产成本低,吸附量大。筛选对重金属尤其是复合重金属耐受性和去除率高的木霉菌株,应用于重金属污染治理,经济有效。
4、从受重金属污染场所分离到的T.viride,可耐受400mg/L的铅、镉、铬及镍,其对镉的最大去除率为125mg/g,可作为生物吸附剂对污水和工业废水中高浓度的镉进行去除(Joshi et al.,2011)。
纤维素酶最高产的理性版里氏木霉
在生物催化剂工程的前沿,里氏木霉(Trichoderma reesei),作为工业纤维素酶生产的重要平台,其在木质纤维素生物燃料行业中占据了80%的份额,见证着生物技术的卓越成就。它的天然能力在于协调分泌一系列高效碳水化合物酶(CAZymes),精准分解木质纤维素,展现出无可比拟的效能。
T.reesei,一种无性繁殖的丝状真菌,是重要的降解纤维素材料的丝状真菌的一种,可分泌一整套降解纤维素的酶系。其中以外切葡聚糖、纤维二糖水解酶的产量最高,占胞外分泌蛋白总量的60%以上。T.reesei长期被用于生产纤维素酶、半纤维素酶和蛋白酶等多种酶类(王肖燕,2012)。
纤维素酶的生产工艺主要有两种,即固体发酵和液体发酵。影响产酶的关键因素包括菌种、培养条件等。张中良等人(1997)通过均匀设计的研究发现,绿色木霉在40%的粗纤维含量、pH为加水4倍、26-31℃的条件下培养45小时,可以达到最大产酶量26mg/g和CMC酶活力20mg/g·h。
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